Tách protein bằng sắc kí lọc gel.

PHÂN TÁCH PROTEIN BẰNG SẮC KÍ LỌC GEL

Sinh viên thực hiên : Phạm Thị Trang
Lớp : Vật Lý CNTN K13
Giảng viên hướng dẫn: TS. Nguyễn Lai Thành
TS. Hoàng Thị Mỹ Nhung
Đại học Khoa học tự nhiên_ĐHQG Hà Nội
Môn: Vật lý sinh học
NỘI DUNG

Đặc điểm chung và các phương pháp tách lọc Protein.


Protein là đại phân tử,chủ yếu là dạng hình cầu và dạng sợi, lưỡng tính, không tan trong nước.
Trong cấu trúc cơ thể sống hoặc trong tế bào, chứa hàng nghìn loại protein ở dưới dạng tự do hoặc kết hợp, để nghiên cứu 1 loại protein trước tiên ta phải tách lọc chúng.
Dựa vào các đặc tính lý hóa, ta có các phương pháp tách lọc như: Kết tủa, thẩm thấu, sắc kí ….



Khái quát về sắc kí lọc-sắc kí lọc gel
Sắc kí là kĩ thuật dùng để phân tách các hợp phần khác nhau của hỗn hợp, dựa trên sự di chuyển khác nhau trong pha động của các chất hòa tan trong hỗn hợp.
Quá trình chung của sắc kí
Cột sắc kí chuẩn bị với mẫu cần phân tách, giá thể được cân bằng với dung dịch đệm.
Mẫu phân tử sinh học được hòa vào dung dịch đệm và được đưa qua cột
Dòng dung dịch đệm được bơm qua cột, mẫu sẽ được đẩy ra khỏi cột theo từng giai đoạn.
Sắc kí lọc gel sử dụng giá thể là các hạt gel, sự phân tách dựa trên kích thước phân tử.




Cơ sở và cấu tạo của sắc kí lọc gel
Các bước tách lọc
Sơ đồ sắc kí lọc gel

KẾT QUẢ

Theo thời gian, ta thu được protein có kích thước nhỏ dần đi ra theo dung môi
Khi dung môi chuyển động chảy qua cột
Các phân tử protein có kích thước lớn không thể đi vào bên trong lõi của hạt gel, chúng đi vào các thể tích trống giữa các hạt gel và đi ra khỏi cột trước theo dung môi
Phân tử có kích thước vừa sẽ bị giữ lại một chút và đi ra chậm hơn
Phân tử nhỏ sẽ khuyếch tán vào trong các hạt gel theo lỗ trên bề mặt gel, cần thời gian nhiều nhất để đẩy ra ngoài sau đó mới đi vào thể tích dung môi

THU KẾT QUẢ

Tùy các loại protein ta chọn các gel có kích thước lỗ khác nhau.
Đầu dò của tương thích với các protein cần phát hệ,biểu đồ biểu diễn sự thay đổi của tín hiệu ra theo thời gian và theo thể tích tiêu hao của pha động

Ưu điểm và nhược điểm của phương pháp

ƯU ĐIỂM
Phương pháp đơn giản, rẻ, đồng nhất
Dung dịch đệm và hat gel không tương tác gì với protein nên ảnh hưởng gì đến protein,không làm biến tính protein
Dùng phương pháp ta đã tách được protein có kích thước khác nahu ra khỏi hỗn hợp
NHƯỢC ĐIỂM
Tốc độ chậm
Độ chính xác chưa được cao,chỉ có thể tách các protein có kích thước khác nhau,còn các loại protein có kích thước giống nhau thì chưa thể phân tách
THANK FOR
YOUR ATTENTION