Máy HPLC
Chia sẻ bởi Nguyễn Thị Xoan |
Ngày 18/03/2024 |
12
Chia sẻ tài liệu: Máy HPLC thuộc Sinh học
Nội dung tài liệu:
TRƯỜNG ĐẠI HỌC SÀI GÒN
LỚP CKM 1091
Tp. Hồ Chí Minh, ngày 06 tháng 04 năm 2011
TRẦN VĂN XO
NGUYỄN THỊ XOAN
HUỲNH THỊ BÍCH NGÂN
NGUYỄN NGỌC TRÂM
NHÓM 4
CONTENT
INTRODUCTION
COMPOSITION
ACTIVITIES
APPLICATIONS
I. INTRODUCTION
HPLC is the abbreviation of the first 04 letters of the English method of identity high-performance LC (Liquid Chromatography High Performance), previously method called high-pressure liquid chromatography (High Pressure Liquid Chromatography)
This method was born from the years 1967-1968 on the basis of Development and improvement of methods of classical column chromatography
Current HPLC method of growing and modernizing higher due to the rapid development of manufacturing industry analysis.
Now it`s a great application in many industries especially the test application for the drug testing industry . And it is a powerful tool in the analysis of multi-component drugs allow qualitative and quantitative.
HPLC là chữ viết tắt của 04 chữ cái đầu bằng tiếng Anh của phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao ( High Performance Liquid Chromatography) ,trước kia gọi là phương pháp sắc ký lỏng cao áp (High Pressure Liquid Chromatography)
Phương pháp này ra đời từ năm 1967-1968 trên cơ sở phát triển và cải tiến từ phương pháp sắc ký cột cổ điển
. Hiện nay phương pháp HPLC ngày càng phát triển và hiện đại hoá cao nhờ sự phát triển nhanh chóng của ngành chế tạo máy phân tích.
Hiện nay nó áp dụng rất lớn trong nhiều nghành kiểm nghiệm đặc biệt là ứng dụng cho nghành kiểm nghiệm Thuốc . Và nó hiện là công cụ đắc lực trong phân tích các thuốc đa thành phần cho phép định tính và định lượng .
High performance liquid chromatography is a separation method in which the liquid mobile phase and stationary phase is contained in the column was divided solid form of a small stool or a liquid coated carriers solid, or a carrier has been modified by chemical bonds with organic functional groups. The process of liquid chromatography-based mechanism of adsorption, distribution, Ion exchange or classified by size (Molecular Sieve .)
1. Concept
1 - Khái niệm :
Sắc ký lỏng hiệu năng cao là một phương pháp chia tách trong đó pha động là chất lỏng và pha tĩnh chứa trong cột là chất rắn đã được phân chia dưới dạng tiểu phân hoặc một chất lỏng phủ lên một chất mang rắn ,hay một chất mang đã được biến đổi bằng liên kết hoá học với các nhóm chức hữu cơ .Quá trình sắc ký lỏng dựa trên cơ chế hấp phụ,phân bố ,trao đổi Ion hay phân loại theo kích cỡ ( Rây phân tử ) .
II. COMPOSITION
1- Solvent
2- Degasse
3- Pump
4-Injactor
5-Column
6- Detector
7-Recorder
8-Printer
Trong đó :
1- Solvent (Bình chứa dung môi pha động)
2- Degasse (Bộ phận khử khí – hệ thống Gradient)
3- Pump (Bơm cao áp )
4-Injactor: Bộ phận tiêm mẫu ( bằng tay hay Autosample)
5-Column:Cột tách ( Pha tĩnh ) ( để ngòai môi trường hay trong bộ điều nhiệt )
6- Detector ( nhận tín hiệu )
7-Recorder: Hệ thống máy tính gắn phần mềm nhận,tín hiệu và sử lý dữ liệu và điều khiển hệ thống HPLC.
8-Printer ( In dữ liệu) .
Note:
- All solvents used for HPLC must be as pure solvent and have clearly stated on the label is used for HPLC or analytical pure solvent.
- All chemicals used for mixing and blending sample buffer system should be used as pure chemical analysis.
Aims to avoid any damage or column chromatography road noise background, the Peak magazine created during analysis.
Lưu ý : - Tất cả các dung môi dùng cho HPLC đều phải là dung môi tinh khiết và có ghi rõ trên nhãn là dùng cho HPLC hay dung môi tinh khiết phân tích .
- Tất cả các hóa chất dùng để pha mẫu và pha hệ đệm phải được sử dụng là hóa chất tinh khiết phân tích .
Nhằm mục đích tránh hỏng cột sắc ký hay nhiễu đường nền,tạo ra các Peak tạp trong quá trình phân tích .
2. Principles of process chromatography column
Stationary phase is an important factor decisive nature of the chromatographic process and the types of chromatography.
- If phase is still high adsorption chromatography, we have adsorbed phase or phases upon the island.
-If stationary phase ion exchange substance, then we have the ion exchange chromatography.
- If the stationary phase liquid chromatography, we have distribution or extraction chromatography.
-If the gel stationary phase, we can gel chromatography or Molecular Sieve.? Along with the stationary phase sprayed to wash off the column analysis, we need a mobile phase.
So if we load the samples for analysis, including analysis of mixture A, B, C… Analytical column, the result of substances A, B, C.. Will be separated from each other after when passing through the column. The decision of the efficient chromatographic separation is synthesized
interactions.
2- Nguyên tắc của quá trình sắc ký trong cột
Pha tĩnh là một yếu tố quan trọng quyết định bản chất của quá trình sắc ký và lọai sắc ký .
-Nếu pha tĩnh là chất hấp phụ thì ta có Sắc ký hấp phụ pha thuận hoặc pha đảo .
-Nếu pha tĩnh là chất trao đổi Ion thì ta có Sắc ký trao đổi ion .
-Nếu pha tĩnh là chất Lỏng thì ta có Sắc ký phân bố hay sắc ký chiết .
-Nếu pha tĩnh là Gel thì ta có Sắc ký Gel hay Rây phân tử .
Cùng với pha tĩnh để rửa rải chất phân tích ra khỏi cột ,chúng ta cần có một pha độ�ng .
Như vậy nếu chúng ta nạp mẫu phân tích gồm hỗn hợp chất phân tích A,B,C vào cột phân tích ,kết quả các chất A,B,C…sẽ được tách ra sau khi đi qua cột .Quyết định hiệu quả của sự tách sắc ký ở đây là tổng hợp các tương tác .
If the Gel stationary phase, we can Gel chromatography or Molecular Sieve. Along with the stationary phase sprayed to wash off the column analysis, we need a mobile phase.
So if we load the samples for analysis, including analysis of mixture A, B, C .. Analytical column, the result of substances A, B, C.. Will be separated from each other after passing through the column. The decision of the efficient chromatographic separation is a combination of interactions.
F1
F2
F3
Nếu pha tĩnh là Gel thì ta có Sắc ký Gel hay Rây phân tử .
Cùng với pha tĩnh để rửa rải chất phân tích ra khỏi cột ,chúng ta cần có một pha độ�ng .
Như vậy nếu chúng ta nạp mẫu phân tích gồm hỗn hợp chất phân tích A,B,C .. Vào cột phân tích ,kết quả các chất A,B,C.. Sẽ được tách ra khỏi nhau sau khi đi qua cột .Quyết định hiệu quả của sự tách sắc ký ở đây là tổng hợp các tương tác .
F2
F3
F1
Total of 03 this interaction will determine which substances are washed off the column first sprayed while keeping the column force is minimal (F1). And vice versa. ? For each substance, the storage capacity provided by 03 F1, F2, F3. F1 and F2 which plays a decisive role. F3 are also factors affecting not great. ? Here F1 is the force holding the analytical column. F2 is the force pulling the mobile phase for analysis of substances from the column. ? So with various substances, the F1 and F2 are different, a result of various substances in the column will move with different speeds and separated from each other when out of the column. (As shown below)
Tổng của 03 tương tác này sẽ quyết định chất nào được rửa rải ra khỏi cột trước tiên khi lực lưu giữ trên cột là nhỏ nhất ( F1) .và ngược lại .
Đối với mỗi chất ,sự lưu giữ được qui định bởi 03 lực F1,F2,F3 .Trong đó F1 và F2 giữ vai trò quyết định .còn F3 là yếu tố ảnh hưởng không lớn .
Ở đây F1 là lực giữ chất phân tích trên cột .F2 là lực kéo của pha động đối với chất phân tích ra khỏi cột .
Như vậy với các chất khác nhau thì F1 và F2 là khác nhau ,Kết quả là các chất khác nhau sẽ di chuyển trong cột với tốc độ khác nhau và tách ra khỏi nhau khi ra khỏi cột . ( như hình dưới đây )
CƠ CHẾ SẮC KÍ HẤP THỤ
Chromatographic process based on the absorption strengths and weakness of different stationary phase for the solute and the wash solution (adsorption contrast) of the solute phase to pull out of the column. The separation of a mixture depends onkinetic properties of the substance adsorbed. In cases of this type are 02 types of adsorption:
+ Phase upon adsorption chromatography (NP - HPLC) stationary phase polarity, non-polar mobile phase.
+ Adsorbed phase chromatography Island (RP - HPLC): non-polar stationary phase, mobile phase polarity.
Type chromatography was applied successfully to separate mixtures of substances with similar properties near each other and which are not polarized, low or medium polarity such as vitamins, analgesic drugs ....
Quá trình sắc ký dựa trên sự hấp phụ mạnh ,yếu khác nhau của pha tĩnh đối với các chất tan và sự rửa giải ( phản hấp phụ ) của pha động để kéo chất tan ra khỏi cột .Sự tách một hỗn hợp phụ thuộc vào tính chất động học của chất hấp phụ . Trong trường loại này có 02 loại hấp phụ :
+ Sắc ký hấp phụ pha thuận ( NP - HPLC) : Pha tĩnh phân cực ,pha động không phân cực .
+ Sắc ký hấp phụ pha đảo (RP - HPLC) : Pha tĩnh không phân cực ,pha động phân cực .
Loại sắc ký này được áp dụng rất thành công để tách các hỗn hợp các chất có tính chất gần tương tự nhau và thuộc loại không phân cực,phân cực yếu hay trung bình như các Vitamin,thuốc hạ nhiệt giảm đau ....
The advantages of chromatographic methods
- Can analyze many compoundssimultaneously,
- No need to evaporate the samples,
- High resolution separation processthrough the column,
- High sensitivity (ppm-ppb) through the probe,
- Volume analysis ofsmall samples (1-1000L).
- Applicable to inorganic ions.
- Applicable to non-volatilesamples and not the heat.
Ưu điểm của phương pháp sắc ký:
Có thể phân tích đồng thời nhiều hợp chất
Không cần làm bay hơi mẫu
Độ phân giải cao nhờ quá trình tách trên cột
Độ nhạy cao (ppm-ppb) nhờ đầu dò
Thể tích mẫu phân tích nhỏ (1-100L)
Áp dụng được cho các ion vô cơ
Áp dụng được với các mẫu không bay hơi và không bền nhiệt.
LỚP CKM 1091
Tp. Hồ Chí Minh, ngày 06 tháng 04 năm 2011
TRẦN VĂN XO
NGUYỄN THỊ XOAN
HUỲNH THỊ BÍCH NGÂN
NGUYỄN NGỌC TRÂM
NHÓM 4
CONTENT
INTRODUCTION
COMPOSITION
ACTIVITIES
APPLICATIONS
I. INTRODUCTION
HPLC is the abbreviation of the first 04 letters of the English method of identity high-performance LC (Liquid Chromatography High Performance), previously method called high-pressure liquid chromatography (High Pressure Liquid Chromatography)
This method was born from the years 1967-1968 on the basis of Development and improvement of methods of classical column chromatography
Current HPLC method of growing and modernizing higher due to the rapid development of manufacturing industry analysis.
Now it`s a great application in many industries especially the test application for the drug testing industry . And it is a powerful tool in the analysis of multi-component drugs allow qualitative and quantitative.
HPLC là chữ viết tắt của 04 chữ cái đầu bằng tiếng Anh của phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao ( High Performance Liquid Chromatography) ,trước kia gọi là phương pháp sắc ký lỏng cao áp (High Pressure Liquid Chromatography)
Phương pháp này ra đời từ năm 1967-1968 trên cơ sở phát triển và cải tiến từ phương pháp sắc ký cột cổ điển
. Hiện nay phương pháp HPLC ngày càng phát triển và hiện đại hoá cao nhờ sự phát triển nhanh chóng của ngành chế tạo máy phân tích.
Hiện nay nó áp dụng rất lớn trong nhiều nghành kiểm nghiệm đặc biệt là ứng dụng cho nghành kiểm nghiệm Thuốc . Và nó hiện là công cụ đắc lực trong phân tích các thuốc đa thành phần cho phép định tính và định lượng .
High performance liquid chromatography is a separation method in which the liquid mobile phase and stationary phase is contained in the column was divided solid form of a small stool or a liquid coated carriers solid, or a carrier has been modified by chemical bonds with organic functional groups. The process of liquid chromatography-based mechanism of adsorption, distribution, Ion exchange or classified by size (Molecular Sieve .)
1. Concept
1 - Khái niệm :
Sắc ký lỏng hiệu năng cao là một phương pháp chia tách trong đó pha động là chất lỏng và pha tĩnh chứa trong cột là chất rắn đã được phân chia dưới dạng tiểu phân hoặc một chất lỏng phủ lên một chất mang rắn ,hay một chất mang đã được biến đổi bằng liên kết hoá học với các nhóm chức hữu cơ .Quá trình sắc ký lỏng dựa trên cơ chế hấp phụ,phân bố ,trao đổi Ion hay phân loại theo kích cỡ ( Rây phân tử ) .
II. COMPOSITION
1- Solvent
2- Degasse
3- Pump
4-Injactor
5-Column
6- Detector
7-Recorder
8-Printer
Trong đó :
1- Solvent (Bình chứa dung môi pha động)
2- Degasse (Bộ phận khử khí – hệ thống Gradient)
3- Pump (Bơm cao áp )
4-Injactor: Bộ phận tiêm mẫu ( bằng tay hay Autosample)
5-Column:Cột tách ( Pha tĩnh ) ( để ngòai môi trường hay trong bộ điều nhiệt )
6- Detector ( nhận tín hiệu )
7-Recorder: Hệ thống máy tính gắn phần mềm nhận,tín hiệu và sử lý dữ liệu và điều khiển hệ thống HPLC.
8-Printer ( In dữ liệu) .
Note:
- All solvents used for HPLC must be as pure solvent and have clearly stated on the label is used for HPLC or analytical pure solvent.
- All chemicals used for mixing and blending sample buffer system should be used as pure chemical analysis.
Aims to avoid any damage or column chromatography road noise background, the Peak magazine created during analysis.
Lưu ý : - Tất cả các dung môi dùng cho HPLC đều phải là dung môi tinh khiết và có ghi rõ trên nhãn là dùng cho HPLC hay dung môi tinh khiết phân tích .
- Tất cả các hóa chất dùng để pha mẫu và pha hệ đệm phải được sử dụng là hóa chất tinh khiết phân tích .
Nhằm mục đích tránh hỏng cột sắc ký hay nhiễu đường nền,tạo ra các Peak tạp trong quá trình phân tích .
2. Principles of process chromatography column
Stationary phase is an important factor decisive nature of the chromatographic process and the types of chromatography.
- If phase is still high adsorption chromatography, we have adsorbed phase or phases upon the island.
-If stationary phase ion exchange substance, then we have the ion exchange chromatography.
- If the stationary phase liquid chromatography, we have distribution or extraction chromatography.
-If the gel stationary phase, we can gel chromatography or Molecular Sieve.? Along with the stationary phase sprayed to wash off the column analysis, we need a mobile phase.
So if we load the samples for analysis, including analysis of mixture A, B, C… Analytical column, the result of substances A, B, C.. Will be separated from each other after when passing through the column. The decision of the efficient chromatographic separation is synthesized
interactions.
2- Nguyên tắc của quá trình sắc ký trong cột
Pha tĩnh là một yếu tố quan trọng quyết định bản chất của quá trình sắc ký và lọai sắc ký .
-Nếu pha tĩnh là chất hấp phụ thì ta có Sắc ký hấp phụ pha thuận hoặc pha đảo .
-Nếu pha tĩnh là chất trao đổi Ion thì ta có Sắc ký trao đổi ion .
-Nếu pha tĩnh là chất Lỏng thì ta có Sắc ký phân bố hay sắc ký chiết .
-Nếu pha tĩnh là Gel thì ta có Sắc ký Gel hay Rây phân tử .
Cùng với pha tĩnh để rửa rải chất phân tích ra khỏi cột ,chúng ta cần có một pha độ�ng .
Như vậy nếu chúng ta nạp mẫu phân tích gồm hỗn hợp chất phân tích A,B,C vào cột phân tích ,kết quả các chất A,B,C…sẽ được tách ra sau khi đi qua cột .Quyết định hiệu quả của sự tách sắc ký ở đây là tổng hợp các tương tác .
If the Gel stationary phase, we can Gel chromatography or Molecular Sieve. Along with the stationary phase sprayed to wash off the column analysis, we need a mobile phase.
So if we load the samples for analysis, including analysis of mixture A, B, C .. Analytical column, the result of substances A, B, C.. Will be separated from each other after passing through the column. The decision of the efficient chromatographic separation is a combination of interactions.
F1
F2
F3
Nếu pha tĩnh là Gel thì ta có Sắc ký Gel hay Rây phân tử .
Cùng với pha tĩnh để rửa rải chất phân tích ra khỏi cột ,chúng ta cần có một pha độ�ng .
Như vậy nếu chúng ta nạp mẫu phân tích gồm hỗn hợp chất phân tích A,B,C .. Vào cột phân tích ,kết quả các chất A,B,C.. Sẽ được tách ra khỏi nhau sau khi đi qua cột .Quyết định hiệu quả của sự tách sắc ký ở đây là tổng hợp các tương tác .
F2
F3
F1
Total of 03 this interaction will determine which substances are washed off the column first sprayed while keeping the column force is minimal (F1). And vice versa. ? For each substance, the storage capacity provided by 03 F1, F2, F3. F1 and F2 which plays a decisive role. F3 are also factors affecting not great. ? Here F1 is the force holding the analytical column. F2 is the force pulling the mobile phase for analysis of substances from the column. ? So with various substances, the F1 and F2 are different, a result of various substances in the column will move with different speeds and separated from each other when out of the column. (As shown below)
Tổng của 03 tương tác này sẽ quyết định chất nào được rửa rải ra khỏi cột trước tiên khi lực lưu giữ trên cột là nhỏ nhất ( F1) .và ngược lại .
Đối với mỗi chất ,sự lưu giữ được qui định bởi 03 lực F1,F2,F3 .Trong đó F1 và F2 giữ vai trò quyết định .còn F3 là yếu tố ảnh hưởng không lớn .
Ở đây F1 là lực giữ chất phân tích trên cột .F2 là lực kéo của pha động đối với chất phân tích ra khỏi cột .
Như vậy với các chất khác nhau thì F1 và F2 là khác nhau ,Kết quả là các chất khác nhau sẽ di chuyển trong cột với tốc độ khác nhau và tách ra khỏi nhau khi ra khỏi cột . ( như hình dưới đây )
CƠ CHẾ SẮC KÍ HẤP THỤ
Chromatographic process based on the absorption strengths and weakness of different stationary phase for the solute and the wash solution (adsorption contrast) of the solute phase to pull out of the column. The separation of a mixture depends onkinetic properties of the substance adsorbed. In cases of this type are 02 types of adsorption:
+ Phase upon adsorption chromatography (NP - HPLC) stationary phase polarity, non-polar mobile phase.
+ Adsorbed phase chromatography Island (RP - HPLC): non-polar stationary phase, mobile phase polarity.
Type chromatography was applied successfully to separate mixtures of substances with similar properties near each other and which are not polarized, low or medium polarity such as vitamins, analgesic drugs ....
Quá trình sắc ký dựa trên sự hấp phụ mạnh ,yếu khác nhau của pha tĩnh đối với các chất tan và sự rửa giải ( phản hấp phụ ) của pha động để kéo chất tan ra khỏi cột .Sự tách một hỗn hợp phụ thuộc vào tính chất động học của chất hấp phụ . Trong trường loại này có 02 loại hấp phụ :
+ Sắc ký hấp phụ pha thuận ( NP - HPLC) : Pha tĩnh phân cực ,pha động không phân cực .
+ Sắc ký hấp phụ pha đảo (RP - HPLC) : Pha tĩnh không phân cực ,pha động phân cực .
Loại sắc ký này được áp dụng rất thành công để tách các hỗn hợp các chất có tính chất gần tương tự nhau và thuộc loại không phân cực,phân cực yếu hay trung bình như các Vitamin,thuốc hạ nhiệt giảm đau ....
The advantages of chromatographic methods
- Can analyze many compoundssimultaneously,
- No need to evaporate the samples,
- High resolution separation processthrough the column,
- High sensitivity (ppm-ppb) through the probe,
- Volume analysis ofsmall samples (1-1000L).
- Applicable to inorganic ions.
- Applicable to non-volatilesamples and not the heat.
Ưu điểm của phương pháp sắc ký:
Có thể phân tích đồng thời nhiều hợp chất
Không cần làm bay hơi mẫu
Độ phân giải cao nhờ quá trình tách trên cột
Độ nhạy cao (ppm-ppb) nhờ đầu dò
Thể tích mẫu phân tích nhỏ (1-100L)
Áp dụng được cho các ion vô cơ
Áp dụng được với các mẫu không bay hơi và không bền nhiệt.
* Một số tài liệu cũ có thể bị lỗi font khi hiển thị do dùng bộ mã không phải Unikey ...
Người chia sẻ: Nguyễn Thị Xoan
Dung lượng: |
Lượt tài: 1
Loại file:
Nguồn : Chưa rõ
(Tài liệu chưa được thẩm định)