Hướng dẫn sử dụng phần mềm D7000 -Multi HSM manage

Hình 01 hệ HPLC Thường
Inteface D-7000
Detector L-7420
Autosample L-7200
Pump L-7100
Degase L-7612
Inteface D-7000
DetectorL-7420
Oven Column
KHỞI ĐỘNG HỆ THỐNG HPLC MERCK HITACHI D-7000
Khởi động máy tính có phần mềm điều khiển kết nối với hệ HPLC
Trên Dektop chọn biểu tượng D-7000 Multi-HSM_manager . Click mở chương trình HPLC .
- Trên Biểu tượng multi-HSM manager chọn hệ săc ký phù hợp (Sys1 or Sys2)
- Nhấn biểu tượng (system status ) Liên kết phần mềm điểu khiển và hệ thống thiết bị . Khi đó màm hình hiển thị
i
Trên bảng Hardware Status trong mục :
- Access type chọn : Control & monitor - Trong mục Hardware Nhấn phím lệnh : Initialize để bắt đầu liên kết
Khi đó trên mục Statur chuyển từ chế độ IDLE sang chế độ Dowload .Thời gian dowload khoảng 01 2 phút . Khi đã nhận đầy đủ thiết bị trên mục Hadrware hiển thị như sau :
Nhấn phím lệnh : Ok .Việc kết nối đã thành công .
Nếu thiếu bất kỳ một thành phần nào như pump, interface,autosample,Detector .thì nhấn phím lệnh Disconect và nhấn lại phím lệnh initialize một lần nữa. Khi đó biểu tượng Acquire Data (Hình con mắt)Sẽ hiển thị rõ ràng không còn mờ nhạt .
D-7000
D-7200
D-7100
D-7240
Biểu tượng Acquire Data
TIME %A %B %C %D FLOW PRESS [--]
0.0 0 25 0 75 1.0 1.0
Trên hệ thống HPLC hiển thị trên màn hình như dưới đây :
STEP VIAL VOL.(L) INJ TIME(min) (S)
1 1 10.0 1/1 0.0
TIME WL ABS PROG LAMP [ I ]
0.0 254 0.0000 1 D2& W D1
Detector
Autosample
Pump
Trên thanh menu chính chọn menu :
- Maintenace Pump wash để rửa phía ngoài Piston của Pump nhằm tăng độ bền của Pump và làm cho Siring tiêm mẫu,đường ống không còn bọt khí.lưu lượng rửa khoảng 2500  5000 Microlit
- Nhấn phím START để bắt đầu quá trình rửa Ngoài Piston pump
-Wash : Nhằm rửa sạch đường Loop tiêm mẫu và đường dẫn mẫu .
Pump wash
wash
Pump Wash Setup :
Syring Speed : 5 
Aspiration Volumn : 5000




Run upon completion of sample table
Start
Ok
Cancel

-Nhấn phím OK trên hộp điều khiển .
Pump wash
wash
Pump Wash
Start pump plunger wash



Ok
Cancel
Sau khi rửa xong hết thể tích cài đặt . trở về màn hình chính .tiếp tục rửa đường Loop

Pump wash
wash
Pump Wash
Pump plunger wash are executing now



Trên thanh menu chính chọn menu :
-Wash : Nhằm rửa sạch đường Loop tiêm mẫu và đường dẫn mẫu . Tránh cho bị nhiễm bẩn khi tiêm mẫu .Xong .Màn hình trở về màn hình chính của chương trình .
(Hoặc Nhấn phím Wash trên bàn phím của Autosampler L-7200 )
Pump wash
wash
Wash
Start Autosampler wash


OK
Cancel
-Wash : Nhằm rửa sạch đường Loop tiêm mẫu và đường dẫn mẫu . Tránh cho bị nhiễm bẩn khi tiêm mẫu .Xong .Màn hình trở về màn hình chính của chương trình .
Trên menu dọc chọn biểu tượng Change Application hiển thi như sau :
Pump wash
wash
Wash
Autosampler wash are executing now


Trong phần này chúng ta sẽ thiết lập bảng Method phân tích mẫu (vd Bcomplex) Theo các điều kiện sau .
Column : Lichrospher RP 18(5m)LichroCART (4.6mm x 250 mm)
Detector : 280 nm
Flow : 1ml/phút
Pha động : Acetonitrin : Methanol: Đệm Acid Acetic 2%( 10:10:80)
Thể tích tiêm : 20 l
Trên menu dọc của phần mềm Multi HSM Manager .Chọn mục Method Setup
Trong hộp thoại Application : Chọn 01 thư mục mà mình cần phân tích (vd Nhóm vitamin)
Nhấn phím select để thoát khỏi hộp thoại trở về màn hình chính của chương trình.
Trên thanh Menu dọc chọn biểu tượng : Method Setup
Pump wash
wash
Nhom cam sot
Trong hộp thoại Open File Mục Method name : Chọn phương pháp cần phân tích ví dụ : chọn phương pháp Bcomplex . Nhấp đôi mouse hay chọn phím lệnh OK để chọn phương pháp phân tích .
Trong Method phân tích Bcomplex có nhiều mục mà ta phải quan tâm trong đó bao gồm các mục sau ( xem trên màn hình hàng phía trên )
Method configuration
Method information
Pump setup
Autosapler Setup
Column Oven Setup
Chanel 1 Detector setup
Time Summary
Event Singnal Setup
Trong Method phân tích Bcomplex có nhiều mục mà ta phải quan tâm trong đó bao gồm các mục sau ( xem trên màn hình hàng phía dưới )
Chanel 1
Chanel 2
Calculation Method
Component table
Concentration table
Coeffcient table
Integration table
Chrom Display Format
Confidencen report
Report Format
Trong Method Configuration thể hiện khai báo cấu hình phần cứng thiết bị bao gồm Modul,Detector,pump,oven column,autosample, các đường dung môi vào,Column của hệ thống .Như trên hình .(chuyển sang phần mềm HPLC )
Method configuration
Trong Method information khai báo tên method, người tạo lập, ghi chú, nhắc nhở, tên các đường dung môi a,b,c,d. và phần history sẽ tự động cập nhật xem với 01 phương pháp đã được sử dụng,sửa đổi đến bao nhiêu lần . .(chuyển sang phần mềm HPLC )
Method configuration
Method information
Trong mục Pump setup quan trọng nhất là ta khai báo cho đúng thời gian phân tích mục Time và tỷ lệ dung môi phân tích theo thời gian của các đường dung môi A,B ,C ,D. Và tốc độ dòng . Thông thường các phương pháp mà ta xây dựng chỉ chạy đẳng dòng . Không chạy Gradian . Lý do là ổn định của phương pháp, đường nền .
Trong mục Autosampler setup các thông số hầu như rất ít thay đổi nên không cần phải điều chỉnh nhiều . Nhưng phải lưu ý thể tích tiêm và thể tích mẫu của mình có .Nếu thể tích tiêm lớn nhưng lượng mẫu lọc ít thì sẽ bị hụt mẫu .
Trong mục Detector setup phải lưu ý phần khai báo loại đèn phù hợp với bước sóng
Đối với đèn D2 bước sóng nằm trong khoảng : 190  380 nm
Đèn Vis W bước sóng nằm trong khỏng : 380  1100 nm
Trong mục Calculation Method thông thường chỉ tính theo chuẩn ngoại mà thôi nên hầu như các thông số không có gì thay đổi nhiều .
Chỉ lưu ý chọn mục Quantitation by : Area (tính theo diện tích)
Calculation : Ext –Std (ngoại chuẩn )
Trong mục Componet Table Là mục khai báo thành phần các hoạt chất có trong thành phần của mẫu. Với thời gian lưu (RT) trùng với peak sẽ thể hiện ngay trên đỉnh của Peak khi in Report . Lưu ý chọn phần Func 1 là sst thì mới hiển thị Peak.
Trong mục Integration Time table thể hiện xác định điểm bắt đầu của Peak và điểm cuối của peak để tính diện tích của Peak nên rất quan trọng . Việc tính toán của tất cả các Peak chuẩn và thử......... Đều phải cùng một thông số của bảng tích phân thì mới cho kết quả là chính xác . Không thể tính mỗi Peak một thông số tích phân khác nhau sẽ dẫn đến sai số nhiều . Ta sẽ nghiên cứu tiếp phần sau khi đánh giá và tính toán lại diện tích .
Trong mục Chromatogram Display Format Nên chọn các mục Khoản ghi tự động chiều cao Peak (Autoscale) ,Auto zero, Full scale , trọng mục Peak Rejection level sẽ quyết định với diện tích lớn hơn hoặc bằng giá trị mình cài đặt thì khi đó phần mềm sẽ nhận đó là Peak nếu nhỏ hơn sẽ bỏ qua .nên trong quá trình phân tích lưu ý với các mẫu có nồng độ rất nhỏ phải khai báo lại .
Trong mục Chromatogram Display Format
Với mục Overlay chọn Peak Labels gồm (time,name)chọn Baselines,Peak-Start-End Markers. để hiển thị trên Peak trong phổ đồ .
Trong mục Confidence report thể hiện rất nhiều thông tin của Peak khi phân tích như so sánh theo các tiêu chuẩn khác nhau JP, USP EUP về tính đối xứng của Peak,số đĩa lý thuyết, độ phân giải ..........vv.........
Trong mục Report Format thông thường nên chọn mục All peak và phần Vial summary chọn Mean và Repetitive Injs chọn cả 4 mục , Trong phần column header nên chọn các cột sau : PK –NUM ,RT, AREA,NAME Để khi báo cáo Report thể hiện các thông số đó.
Như vậy ta đã thiết kế xong 01 phương pháp phân tích bao gồm rất nhiều mục tuy nhiên thông thường các phương pháp phân tích đã được thiết lập sẵn sàng ,Khi phân tích ta chỉ cần mở phương pháp ra và xem các thông số đã đúng theo qui trình phân tích hay chưa sau đó điều chỉnh nếu cần thiết . Đóng phương pháp ,lưu lại .
Trong phần này chúng ta sẽ thiết lập bảng thứ tự Pump mẫu của Autosempler hoặc Pump bằng tay .
Trên menu dọc của phần mềm Multi HSM Manager .Chọn mục Sample Setup
Trong mục Open File chọn chọn tên bảng BCOMPLEX . Nhắp đôi chuột .hoặc chọn phím OK để mở bảng Sample BCOMPLEX.
Trong mục Edit Table từ bàn phím Nhập vị trí Vial No ( Vị trí tiêm mẫu trong Rack ) ,nhập Vol ( l) (Thể tích tiêm mẫu) , Inj per Vial (số lần mẫu tiêm trên 1 Vial)(thông thường 06 lần cho mẫu chuẩn 1 để đánh giá tính tương thích của hệ thống). Type(kiểu của mẫu) (STD hay UNK .Tuy nhiên để tiện cho báo cáo phân tích chúng ta chỉ chọn kiểu STD ) . Sampler Name (Tên của mẫu), Method Name (phương pháp phân tích )
Col Equil Time(min) ( thời gian chờ ổn định đường nền tính theo phút)thông thường mục này nhập bằng 0. chỉ nhập thời gian khi cần thiết . Nhập giá trị Max Ch1 Noise (giá trị Max của độ nhiễu đường nền (200). Max Ch1 Drift (giá trị độ trôi đường nền (200) .Với giá trị Noise và Drift càng nhỏ thì độ ổn định đường nền càng lớn . Nhập Sampler Description các ghi chú mẫu nếu cần thiết .
Tiếp tục nhập các hàng tiếp theo ,theo các thứ tự trên. Tuy nhiên không nhập phần Method Name vì để ghi chung vào 01 Report .
Trong mục Setup Information .Phần Sample Table Name Nhập tên bảng Sample nếu cần thiết (thông thường đã có sẵn ). Trong mục Template Parameter chọn Method name theo đúng tên phương pháp phân tích mà mình đã đặt .
Xong đóng bảng Sampler Setup .và lưu lại .
Trên Menu chính chọn biểu tượng Acquire Data.
Trong mục Open sample For Data Acquisition chọn bảng Sampler phân tích cần phân tích (vd : Bcomplex) . Chọn OK hay nhấp đôi chuột .
Ok Cancel

Open sample Table For Data Acquisition
Acquisition
Trong mục Data Acquisition Monitor HPLC Sys1 chọn: - Start Run : Pump mẫu 01 lần - Start Series : Pump tất cả mẫu trong bảng Sampler - Noise Test : kiểm tra giá trị Noise và Drift của đường nền
Để phân tích mẫu 01 ,để thử khả năng tách của peak hay tìm phương pháp phân tích nhấn phím Start Run . Để Kiểm tra độ ổn định đường nền nhấn phím Noise test .
Để phân tích mẫu Nhấn phím Start Series .Khi đó Phần mềm sẽ kiểm tra giá trị Noise và Drift nếu giá trị Noise và Drift < giá trị cài đặt trong bảng Sampler Setup thì mẫu sẽ được Pump . Nếu giá trị > giá trị cài đặt thì hệ thống sẽ tiếp tục chạy đường nền và kiểm tra cho đến khi đạt thì mới Pump mẫu. Như vậy máy sẽ tự động Pump thứ tự mẫu như đã được cài đặt trong bảng Sampler Setup . Khi xong màn hình hiển thị :
Để kết thúc chương trình chạy Sắc ký nhấn Phím lệnh Monitor ,tiến hành chế độ rửa Column cho sạch theo qui trình rửa cột đã hướng dẫn .
Trong khi phân tích ta luôn kiểm tra lại các kết quả tính toán của phần mềm đối với tất cả các mẫu đã phân tích. Khi kết quả đạt yêu cầu thì tiến hành tính toán .Nếu không đạt yêu cầu của bất kỳ mẫu tiêm nào đó thì phải tiêm mẫu lại hoặc tìm nguyên nhân gây ra sự sai sót của kết quả.
Trước hết ta kiểm tra các kết quả đã được ghi nhận và các chỉ số đi kèm theo
Trên Menu dọc chính chọn Reprocess Data
Trong mục Open File chọn đúng số thứ tự Data của mẫu phân tích chọn OK hoặc Nhắp đôi chuột vào tập dữ liệu khi đó phổ đồ sẽ hiển thị .
Trong bảng Injection table : Nhấp đôi chuột vào mũi tiêm đầu tiên phổ đồ sẽ hiển thị toàn bộ các Peak theo toàn thời gian .
Nhấp Mouse vào đây
Trên phổ đồ quan sát đường cắt đáy Peak đã ngang bằng với đường nền (Baseline) không? Nếu đường cắt quá xa đường nền thì phải nhấp Mouse vào nút lệnh bảng Integration time table . Và điều chỉnh các thông số Noise và Sensitiviti giảm hay tăng sau đó nhấn phím lệnh Update Method đưòng cắt peak sẽ được sửa lại sao cho đường cắt đáy Peak nằm ngang với đường nền. Mục đích điều chỉnh này nhằm cho phép việc tính diện tích các Peak cho hoàn toàn chính xác và có độ lặp lại cao.
Nhấp Mouse vào đây
Nhấn phím lệnh Update Method
Trong bảng Component table kiểm tra lại thời gian lưu của các Peak có trong thành phần phân tích .nếu sai ,không có tên thì nhập lại vào các cột RT,Name,Func 1 cho đúng .và cũng nhấn phím lệnh Update bên cạnh để cập nhật .(lưu ý ta luôn khai báo trong cột Func 1 Là : SST ).
Nhấn phím lệnh Component table
Sau khi đã cập nhật được bảng tích phân nhấp Mouse vào phím lệnh Injection Table .Bảng các mũi tiêm sẽ hiển thị lại dùng Mouse chọn tất các các mũi tiêm xong nhấn phím lệnh Recalculate để tính toán lại diện tích và các thông số của Peak .Khi đó 01 bảng Report mới sẽ được cập nhật vào thư mục của máy song song với bảng report gốc (original)
Nhấn phím lệnh Modify Report để xem xem kết quả Report các mẫu tiêm và kiểm tra
Nhấp Mouse vào đây
Nhấp phím lệnh tính toán lại
Sau khi nhấn phím lệnh Modify Report toàn bộ Report sẽ hiển thị . Ta sẽ kiểm tra lại các thông số Area , RSD Area , RSD RT của các mẫu chuẩn và thử xem có đạt yêu cầu không? Đối với RSD Area < 2.0 , RSD RT < 1.0 . Sau đó vào menu File chọn mục Print để in trang cần thiết (thông thời là trang tổng hợp của các mũi tiêm của cùng 01 mẫu )
Trong trường hợp khi tiêm mẫu ta đánh nhầm tên của mẫu thì vẫn có thể sửa đổi lại được bàng cách : Nhấn vò phím lệnh Edit . Khi đó bảng Edit sẽ hiện ra và ta sẽ sửa các mẫu tiêm cho đúng lại .Xong nhấn phím lệnh Save để trở về màn hình chính .
Sau khi đã sửa xong tên mẫu ta phải nhấn phím lệnh Recalculate và tiếp tục vào mục Modify Report để in Report.
Trên Menu File chọn Mục Print.........
Trọng hộp Print : Mục Select Print chọn máy in ,mục Pager chọn trang có Report chung cần in.
Nhấn phím Print để in Report .
Sau khi in xong report đóng tất cảc các cửa sổ của report . Khi đó bảng Method sẽ hiện ra kèm theo bảng nhắc nhở ta có lưu hay không lưu sự thay đổi nào đó của Method .Nên nhấn phím lệnh Jes và đóng Method lại.
Đóng xong Method trở về màn hình giao diện đầu tiên của chương trình . Đóng của sổ chương trình và thoát khỏi trình điều khiển hệ thống HPLC .
Đóng xong Method trở về màn hình giao diện đầu tiên của chương trình . Đóng của sổ chương trình và thoát khỏi trình điều khiển hệ thống HPLC .