Dien di

Điện di là gì?
Hiện tượng các phân tử dịch chuyển trên giá thể trong môi trường có dòng điện chạy qua.
Giá thể có thể là:
Giấy
Gel (acrylamide, agar, agarose, tinh bột.)
Kỹ thuật điện di cho phép tách được các tiểu phần có khối lượng phân tử khác nhau, dùng cho các nghiên cứu, phân tích những tiểu phần đó.
Nguyên tắc điện di
Tốc độ dịch chuyển khác nhau theo khối lượng phân tử của các tiểu phần.
Điện di một chiều: (-) (+)
Các tiểu phần có thể tích điện (-) hoặc (+) cho nên phải làm cho tất cả các tiểu phần tích điện (-) bằng cách phủ lên các tiểu phần chất SDS (Soudium dedoxyl sunphate)

Thiết bị và vật liệu điện di
Máy điện di
Bộ nguồn điện
Kỹ thuật chế gel điện di bao gồm các bước:
(1) Lắp ráp khuôn gel
(2) tạo gel
(3) đổ gel


Điện di DNA
Đặc điểm cấu trúc của ADN
DNA được cấu tạo từ các nucleotide
DNA mạch kép có các cặp base liên kết với nhau bằng các cầu nối hydrro
Để tính kích thước phân tử DNA người ta dùng đơn vị bp (base pair)- cặp base, cặp nucleotide. 1 Kb (kilo base) = 1000 bp
Tách chiết ADN
Tách chiết ADN từ mô sống
Kiểm tra bằng quang phổ hấp thụ ở 260 nm
Phân tích diện di để khẳng định dung dịch chứa ADN
Chế tạo bản gel agarose
Bột agarose được đun cùng với dung dịch đệm chứa SDS 0,8%; 1,0%; 1,5%.
Đổ bản gel
Lắp ráp vào máy điện di
Chạy điện di
Chụp ảnh để phân tích
Preparation of an agarose gel
Hình ảnh điện di ADN
Hình ảnh điện di ADN
Điện di Protein
Phương pháp
Cấu trúc và đặc tính của protein
Cấu tạo từ khoảng 20 loại acid amin
Cấu trúc bậc I, II, III, IV. Bậc IV gồm nhiều chuỗi polypeptid
Chuỗi polypeptid có thể tích điện (+) hoặc (-)

Quy trình điện di protein
Biến tính protein
Diện di ở thế hiệu khác nhau
Chụp anh và phân tích kết qua thành phần điện di protein
Chiết protein
Chiết protein
Protein chiết từ mẫu tươi bằng dung dịch đệm ở 40C (NaCl, H2O, Tris.HCl.) trong 24h.
Ly tâm thu dịch chứa protein.
Dịch chứa protein được bảo quản ở 200C.

Tạo bản gel, tra mẫu và chạy điện di

Chế gel (gel cô và gel tách)
Đổ gel gồm 2 lớp.
Đưa bản gel vào bộ phận điện di
Tra mẫu vào giếng
Chạy điện di
Chụp ảnh để phân tích
Hinh anh phổ điện di protein chiết bằng nước cất của các dòng đậu xanh đột biến (M. marker; 1. Mỡ giống gốc; 2. MX10; 3. MXU21; 4. MXE01; 5. MX1608, 6. MX1103; 7. Tiêu giống gốc; 8. TXU21; 9. TX16012. ( : bang mất đi : bang xuất hiện ) (Chu Hoàng Mậu,2000)

Hình ảnh điện di protein ở lúa
Hình ảnh điện di protein ở lạc